崩大碗水提液对高尿酸血症模型大鼠肾功能、尿酸盐代谢的作用研究

胡向阳  刘桃丽  林春淑 李安 杨璇

（中山大学附属第五医院中医科，广东 珠海 519000）

[摘要]目的：观察崩大碗水提液对HUA模型大鼠肾功能、尿酸盐代谢的影响。方法：将48只Wistar雄性大鼠随机分为4组：正常对照组、模型对照组、苯溴马隆组、崩大碗水提液组，建立HUA大鼠模型，检测造模和给药前后各组大鼠血尿酸、血肌酐、血尿素氮和尿酸盐转运体。结果：与正常对照组比较，给药前第14天，各实验组大鼠血UA、BUN、Scr、UAT水平均显着升高(P<0.01）。与模型对照组比较，给药后第7，14，21天，苯溴马隆组和崩大碗水提液组血UA、UAT不同程度降低(P<0.01或P<0.05）；苯溴马隆组BUN、Scr不同程度升高(P<0.01或P<0.05）；给药后第14，21天，崩大碗水提液组血BUN降低(P<0.05）。与苯溴马隆组比较，给药后第21天，崩大碗水提液组血BUN降低(P<0.05）。给药后第7，14，21天，崩大碗水提液组血Scr降低(P<0.05）。结论：崩大碗水提液对HUA模型大鼠肾功能、尿酸盐代谢有保护和调节作用。

[关键词] 崩大碗；高尿酸血症；肾功能；尿酸盐代谢；

The effect of Centella asiatica water decoction on the renal function and Urate metabolism   in high uric acid hematic disease model in rats

Hu Xiang-Yang  Lin Chun-Shu  Yang-xuan

     (The Fifth Affiliated Hospital Of Sun Yetsen University, ZhuHai,GuangDong, 519000)

Obstract: Objective: To observe the effect of Centella asiatica water decoction on the renal function and Urate metabolism in high uric acid hematic disease model in rats .Methods:48 male rats were randomly divided into normal control group, model control group, Benzbromarone group,Centella asiatica group.the model of HUA in the rat is established, testing the blood uric acid, serum creatinine, blood urea nitrogen and uric acid salt transporter of the experimental rats, before and after dosing. Results: Compared with normal control group, The experimental group rats blood UA, BUN, Scr and UAT levels were significantly higher (P < 0.01) ,14 days prior to dosing. Compared with model control group, 7,14,21 days after the dosing, the UA and UAT levels of Benzbromarone group and Centella asiatica group were varying degrees lower (P < 0.01 or P < 0.05); The BUN and Scr of Benzbromarone group were varying increased (P < 0.01 or P < 0.05); 14,21 days after the dosing,the BUN of Centella asiatica group was reduced (P < 0.05). Compared with Benzbromarone group,21 days after the dosing, the BUN of Centella asiatica group was lower (P < 0.05);7,14,21 days after the dosing, the Scr of Centella asiatica group was lower (P < 0.05). Conclusion: Centella asiatica has some protective effects to protect and regulate the renal function and urate metabolism in HUA model rats.

Key  words: Centella asiatica;HUA; renal function;urate metabolism;

[通讯作者] 胡向阳（1975-），男，广东珠海人，博士，副主任医师，硕士生导师，研究方向：从事中医药防治代谢疾病研究。担任世界中医药联合会代谢性疾病委员会理事，中国老年学会抗衰老科学委员会理事，广东省中医药内科学会、中西医结合学会、针灸学会、肝病学会等专业委员会委员。主持或参与国家、省市级中医药科研课题10余项，在中医杂志、中国中药杂志、中药材、时珍国医国药、亚太传统医药、中华医学杂志英文版等发表40多篇著作。荣获中山大学优秀青年教师，中山大学叶任高-李幼姬优秀青年教师奖。电话:0756-2528182，Email：aikongzhi@163.com。

由高尿酸血症(原发性高尿酸血症)(HyPeruricemia,HUA)引起的慢性肾损害是长期研究热点。研究显示，约10%的HUA会发生痛风，在有效降尿酸(uric acid,UA)之前，高达40%的痛风患者存在明显的肾损害，包括肾小球硬化、间质性肾炎、肾孟肾炎、肾结石或肾功能不全等[1]。依据中国风湿病学会制定的《原发性痛风诊治指南》建议[2]，无症状HUA以非药物治疗为主，一般不推荐使用降尿酸药物；但经过饮食控制血尿酸仍高于535μmol/L、有家族史或伴发相关疾病的血尿酸高于476μmol/L时，可进行降尿酸治疗。目前临床一线西药有苯溴马隆、别嘌呤醇、非布司他等，多需要长期服用，但是对于肾功能不全者或肾衰者慎用或禁用，有治疗局限。中药如绞股蓝、萆薢、四妙汤等[3,4,5]治疗高尿酸血症的研究已受到重视和关注，这些中药临床或实验研究发现有促尿酸排泄、肝肾毒性小、作用和缓等优越性。我们近年在临床实践中观察到，崩大碗单方或复方应用对HUA有较好疗效。崩大碗又名积雪草、老公根、崩口碗、雷公碗等,为伞形科植物积雪草[Centella asiatica(L.)Urban]的全草，是广东地区民间常用的中草药，以全草入药，有清热利湿、活血止血、解毒消肿等功效，治疗湿热黄疽、痈肿疮毒、传染性肝炎等疾病[6]。本研究建立HUA大鼠模型，观察崩大碗水提液对模型大鼠肾功能、尿酸盐代谢的影响。

1. 材料与方法

1.1 实验动物  

Wistar雄性大鼠48只，SPF级，体重200 ± 20g，由中山大学实验动物中心提供，合格证号：粤检证字2013C506。每笼4只分笼饲养，自由饮水，及时更换垫料，定期清洗鼠笼，12 h光暗循环，适应性饲养1周后用于本实验。

1.2 实验药物

    苯溴马隆(商品名:立加利仙),昆山龙灯瑞迪制药有限公司生产,批准文号：H20010790，产品批号：131106，产品规格：50mg/粒，临用前以生理盐水溶解浓度为5mg/mL。崩大碗饮片购于广东省中医院，按水煎煮工艺制备崩大碗水提液：将2kg的崩大碗放人5L蒸馏水中，充分浸泡2h，用武火煎煮至药水沸腾，调整改为文火煎煮30min，过滤；进行二次煎煮，加3L蒸馏水，沸腾后文火煎煮20min，过滤。最后将两次煎煮的滤液合并，用离心机3000r／min离心10分钟，将上清液取出浓缩定容，制成2g/mL生药的崩大碗水提液，置4℃冰箱保存备用。

1.3 试剂与仪器  

氧嗪酸钾、羧甲基纤维素和钠酵母粉由广州天马精细化工厂生产；腺嘌呤，美国Amresco 公司产品；血UA、血肌酐（Serum creatinine,Scr）、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）检测试剂盒，南京建成生物有限公司生产；尿酸盐转运体（urate transPorter,UAT）原位杂交检测试剂盒，武汉博士德生物工程有限公司生产。STAR72600酶标仪，美国Jarrel-ASH公司生产；LD4-2型低速离心机，北京医用离心机厂生产；AU640全自动生化分析仪，日本奥林巴斯OLYMPUS公司生产。

1.4动物分组、模型制备与给药方法

Wistar大鼠48只，采用数字随机分组法分为4组，即正常对照组、模型对照组、苯溴马隆组、崩大碗水提液组。

按参考文献[7]的造模方法，将腺嘌呤用蒸馏水溶解成4g/L的悬浊液,将羧甲基纤维素钠粉剂用生理盐水，配成8g/L的乳状溶液，再加入氧嗪酸钾配成终浓度为25g/L的乳悬液。除正常对照组外，其余各组均以给予10%酵母饲料饲喂，于20:00时灌胃给予腺嘌呤100mg·kg-1；同时分2次(9:00时与19:00时)，腹部皮下注射配置的羧甲基纤维素钠粉和氧嗪酸钾配乳悬液，100mg·kg-1。每天 1 次，连续 14 天，以制备高UA血症模型。

正常对照组给予普通大鼠颗粒饲料和同体积的生理盐水，模型对照组给予等体积生理盐水灌胃，苯溴马隆组灌胃给予苯溴马隆20mg·kg-1，崩大碗水提液组灌胃给予崩大碗水提液10g·kg-1。每天 1 次，连续21天。

1.5 指标检测

分别于造模第0，14天和给药后的第7,14,21天10:00时，腹腔注射水合氯醛麻醉各组大鼠，内眦静脉采血约2ml，将采取的新鲜血加入含肝素抗凝的试管中，混匀，4℃，3500转/分离心15分钟，收取上清液(血清)。用全自动生化分析仪测定血UA、Scr、BUN；采用ELISA方法检测血清UAT水平，检测流程按照试剂盒说明操作。

1.6 统计学处理

使用SPSS17.0 for windows系统软件进行统计学处理。方差齐，均值间差异比较采用t检验或单因素方差分析；方差不齐，均值间差异比较采用校正t检验；组间两两比较采用q检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各实验组大鼠血UA、BUN、Scr比较

表1  各实验组大鼠血UA比较 (n =12，μmol/L，`X ± S)

注：与正常对照组比较，1)P<0.01,2)P<0.05；与模型对照组比较，3)P<0.01,4)P<0.05；与苯溴马隆组比较，5)P<0.05。

与正常对照组比较，给药前第0天，各实验组大鼠血UA正常，比较无统计学差异，符合实验大鼠入选条件；给药前第14天，各实验组大鼠血UA均显着升高(P<0.01），表示HUA大鼠造模成功；给药后第7，14，21天，模型对照组血UA均显着升高(P<0.01）。与模型对照组比较，给药后第7，14，21天，苯溴马隆组血UA均显着降低(P<0.01），崩大碗水提液组血UA有不同程度降低（(P<0.05或P<0.01））。与苯溴马隆组比较，给药后第7天，崩大碗水提液组血UA升高(P<0.05）。（见表1）

表2  各实验组大鼠血BUN比较 (n =12，mmol/L，`X ± S)

注：与正常对照组比较，1)P<0.01,2)P<0.05；与模型对照组比较，3)P<0.05；与苯溴马隆组比较，4)P<0.05。

与正常对照组比较，给药前第0天，各实验组大鼠血BUN正常，比较无统计学差异；给药前第14天，各实验组大鼠血BUN显着升高(P<0.01），表示HUA造模有肾损害；给药后第7，14，21天，模型对照组血BUN显着升高(P<0.01），表示肾损害较未修复。与模型对照组比较，给药后第7，14，21天，苯溴马隆组血BUN显着升高(P<0.01），表示肾损害持续；在给药后第14，21天，崩大碗水提液组血BUN降低(P<0.05）。与苯溴马隆组比较，给药后第21天，崩大碗水提液组血BUN降低(P<0.05）。（见表2）

表3  各实验组大鼠血Scr比较 (n =12，μmol/L，`X ± S)

注：与正常对照组比较，1)P<0.01,2)P<0.05；与模型对照组比较，3)P<0.01；4)P<0.05；与苯溴马隆组比较，5)P<0.01。

与正常对照组比较，给药前第0天，各实验组大鼠血Scr比较无统计学差异；给药前第14天，各实验组大鼠血Scr均显着升高(P<0.01）；给药后第7天，各实验组大鼠血Scr均显着升高(P<0.01）；给药后第14，21天，苯溴马隆组大鼠血Scr不同程度升高(P<0.01或P<0.05）。与模型对照组比较，给药后第7，14，21天，苯溴马隆组血Scr不同程度升高(P<0.01或P<0.05）。与苯溴马隆组比较，给药后第7，14，21天，崩大碗水提液组血Scr降低(P<0.05）。（见表3）

2.2 各实验组大鼠血UAT水平比较

表4  各实验组大鼠血UAT水平比较 (n =12，ng/ml，`X ± S)

注：与正常对照组比较，1)P<0.01,2)P<0.05；与模型对照组比较，3)P<0.01；4)P<0.05。

与正常对照组比较，给药前第0天，各实验组大鼠血UAT水平比较无统计学差异；给药前第14天，各实验组大鼠血UAT水平均显着升高(P<0.01）；给药后第7，14，21天，模型对照组血UAT水平均显着升高(P<0.01）。与模型对照组比较，给药后第7，14，21天，苯溴马隆组和崩大碗水提液组血UAT水平均有不同程度降低(P<0.05或P<0.01）。与苯溴马隆组比较，给药后第7，14，21天，崩大碗水提液组血UAT水平比较无统计学差异。（见表4）

3 讨论

正常状态下人体每天要排出UA800～1000mg，其中70%经肾脏排泄，其余从肠道和胆道排泄，肾脏是UA排泄的重要器官[8]。HUA会导致尿酸盐结晶沉积在肾小管-间质部位，可阻塞管腔，破坏肾小管，导致肾小管功能障碍。HUA还可引起血管内皮功能障碍，导致肾间质纤维化，引起肾缺血，引起慢性肾脏病变[9,10]。UAT为生电型尿酸盐/阴离子交换体，是贯穿细胞膜的高度选择性离子通道，在调节全身尿酸稳态中发挥重要作用，高尿酸环境中，UAT生成增多[11]。本实验研究发现，崩大碗水提液可以降低HUA模型大鼠的血UA、BUN、Scr、UAT水平，值得关注的是，与目前促尿酸排泄一线西药苯溴马隆比较，给药后第21天，崩大碗水提液组血BUN降低(P<0.05）；给药后第7，14，21天，崩大碗水提液组血Scr降低(P<0.05），崩大碗显示出较好保护肾功能作用。

HUA和痛风病多由先天体质或禀赋异常，或素体脾虚，中年体衰，加之饮食不节，沉溺醇酒，嗜好膏粱厚味，日积月累，导致脾失健运，升清降浊功能紊乱，湿热浊毒内生，留于脏腑关节或外注经筋皮部而发病。西医可见HUA、痛风性关节炎、痛风石、痛风性肾病等。朱丹溪[12]在《格致余论·痛风》中记载:“患痛风，叫号撼邻，余视之曰：此恶血人经络证，血受湿热，久必凝浊，所下未尽，留滞隧道，所以作痛。”崩大碗是岭南地道草药，具有清热利湿、活血止血、解毒消肿等功效，两广民间在春夏季有用其煲汤以清热祛湿的传统，但其用于治疗HUA和痛风病的文献报道较少。本实验着重观察崩大碗传统用药方法即水提液，对HUA模型大鼠的肾功能、尿酸盐代谢的作用，发现有较好的药效价值，其有效化学成分、调控途径、量效和毒理学等需要进一步研究。

[参考文献]

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